1, 0.04%溴甲酚紫指示液如何配制?
1%的溴酚蓝将托盘天平上称取1g溴酚蓝定溶于100ml无水乙醇中,转移入滴瓶中,贴标签备用。0.05%的溴酚蓝配western blot用的2*SDS上样缓冲液需要用到0.1%的溴酚蓝,2-DE中溴酚蓝一般也是配成0.1%母液。实际上,溴酚蓝在水中的溶解度不高,直接将0.1g溴酚蓝溶于100ml水是有困难的。下面是其较合适的配制方法:0.05%的溴酚蓝配制方法:取溴酚蓝0.1g,加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.0ml使溶解,再加水稀释至200ml,即得。 变色范围pH2.8~4.6(黄→蓝绿)。只是不知道加入NaOH会不会影响2-DE实验。估计影响不大,因为指示剂用量毕竟很少。1%溴酚蓝加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。溴酚蓝其钠盐易溶解在水里。
2, 如何配溴酚蓝指示剂?
0.1%溴甲酚绿:称取0.1g溴甲酚绿,溶于95%乙醇稀释至100ml;0.2%甲基红:称取0.2g甲基红,溶于95%乙醇稀释至100ml。按比例3:1 混合。 50ML的2g/L溴甲酚绿95%乙醇溶液与10mL的2g/L甲基红95%溶液混合。0.5g溴甲酚绿95%乙醇溶液与0.1g甲基红95%溶液等体积混合。一般按第一种配。试验的时候可以看下具体试剂要求,按什么方法配制的,或者按照标准GB/T 602配制!
名词解释
溴甲酚绿
溴甲酚绿[1]是细胞染色剂。指示剂,pH=3.8时呈黄色,pH=5.4时呈蓝绿色,pH=4.5时开始有颜色的明显变化。
甲基
甲基(methyl group),甲烷分子中去掉一个氢原子后剩下的电中性的一价基团。由碳和氢元素组成。甲基作为一个化学基团(-CH3),它能够结合在DNA上某些特定部位,这个甲基和DNA结合过程叫甲基化,相反,甲基从DNA上脱落的过程就叫做去甲基化。