首页 >  知识中心 >  新闻详情

福林酚试剂法 福林酚试剂法测定蛋白质含量的方法?

来源:朵拉利品网  |  2020-04-28 06:23:30

1, 福林酚试剂法测定蛋白质含量的方法?



原理:蛋白质与福林酚试剂反应,生成深蓝色复合物。蓝色的深浅与蛋白质含量成正比。可用分光光度计于500nm波长下进行测定。与标准曲线对照,而确定蛋白质含量。
操作方法:1、标准曲线的制作:分别吸取0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0ml标准溶液于小试管中,分别加进不同量的蒸馏水,补足到1ml。各加入5ml试剂甲,混匀后于室温下(25℃左右)放置10min。再加入0.5ml试剂乙,立即混匀,于室温下反应30min。于500nm波长下测定光密度。以吸光值作为纵坐标,蛋白质含量为横坐标绘制标准曲线。
2、样品蛋白质含量的测定
取1ml样品溶液,加入5ml试剂甲,混匀,于25℃左右放置10min。再加入0.5ml试剂乙,立即摇匀,于25℃左右反应30min,测定吸光值,从标准曲线查出样品蛋白质含量。
生物帮上面有的,免疫组化染色试剂盒

2, 福林



看看在不在药典三部,生物制品那一册里,我记的不是很清楚了。
药检所里应该有这个依据。
看看血舒通注射液的标准里好像有这项。
试剂 碱性铜溶液 取氢氧化钠10g,碳酸钠50g,加水400ml使溶解,作为甲液;取酒石酸钾0.5g,加水50ml使溶解,另取硫酸铜0.25g,加水30ml使溶解,将两液混合,作为乙液。
临用前,甲液与乙液合并,并加水至500ml。
操作法 (1) 对照品溶液的制备 取牛血清白蛋白对照品,加水制成每1ml中含0.3mg的溶液。
(2) 供试品溶液的制备 照各药品项下的方法制备。
(3) 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0.0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9ml,分别置具塞试管中,各加水至1.0ml,再分别加入碱性铜溶液1.0ml,摇匀,各加入福林酚溶液(福林试液中的贮备液1→16)4.0ml,立即混匀,置55℃水浴中准确反应5分钟,置冷水中10分钟,在650nm的波长处测定吸收度;同时以0管作为空白。以测得的吸收度与对应的浓度计算回归方程。
(4) 测定法 精密量取供试品溶液1.0ml,照标准曲线的制备项下的方法,自“加入碱性铜溶液”起,依法测定,从回归方程求得供试品溶液的浓度,并乘以稀释倍数,即为多肽含量。
?
或者是:胸腺肽溶液国家药品标准附录二——福林酚测定法[10]

3, 福林酚法的测定方法出自哪个标准?



可以
以测定水果为例
1 材料和方法
1.1 试剂
1.1.1 药品 钨酸钠(Na2WO4·2H2O)、钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)、硫酸锂(Li[2]sO4)、磷酸(H3PO4 85%)、磷钼酸(24MoO3-P2O5·xH2O)、碳酸钠(Na2CO3)、盐酸和溴水为分析纯。一水合没食子酸标样为Sigma-Aldrich公司产品。水为蒸馏水。
1.1.2 FC显色剂 称取50.0 g钨酸钠和12.5 g钼酸钠,用350 mL蒸馏水溶于1 000 mL回流瓶中,加入25mL磷酸和50mL盐酸,混匀,微沸回流2 h.加入75.0 g硫酸锂、25mL蒸馏水和数滴溴水,开口沸腾约15min(至溴水挥尽为止),冷却,定容至500mL,过滤。置棕色瓶中保存备用。使用时加入1倍蒸馏水稀释。1.1.3 FD显色剂称取100.0 g钨酸钠和20.0 g磷钼酸,溶于200mL蒸馏水,加入5mL磷酸。加热回流2 h,冷却,定容至lL。
1.1.4 7,5%碳酸钠溶液称取37.5 g碳酸钠,溶于250mL温水,混匀,冷却,定容至500mL。
1.1.5 一水合没食子酸标准溶液称取0.110 g-水合没食子酸,用蒸馏水溶解、定容至100 mL,此溶液质量浓度为1 000 mg/L。分别吸取此溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL至100 mL容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,所得一水合没食子酸标准溶液的质量浓度分别为0.0、10、20、30、40、50 mg/L。
1.2 仪器
紫外分光光度计。
1.3 方法
1.3.1样品预处理将水果洗净、晾干。取可食部分切碎,组织捣碎机匀浆,备用。
1.3.2 总多酚的提取取试样适量(葡萄酒吸取2mL,葡萄和柿子称取2 g匀浆,其他水果称取5 g匀浆),用80mL蒸馏水洗人100mL容量瓶中,至100℃沸水浴中保温30min,取出,冷却,定容,过滤,滤液备用。
1.3.3测定使用5mL刻度吸管吸取1.0mL滤液(若多酚含量过高,可适当稀释)或一水合没食子酸标准溶液,分别用刻度吸管加入FC显色剂或FD显色剂及7.5%碳酸钠溶液,用蒸馏水定容至10 mL,混匀,室温显色(下同),测定765 nm吸光度,根据稀释倍数和从标准曲线中查出的浓度,计算样品多酚含量。

名词解释


试剂

试剂(reagent),又称生物化学试剂或试药。主要是实现化学反应、分析化验、研究试验、教学实验、化学配方使用的纯净化学品。一般按用途分为通用试剂、高纯试剂、分析试剂、仪器分析试剂、临床诊断试剂、生化试剂、无机离子显色剂试剂等。

蛋白质

蛋白质(protein)是大型生物分子,或高分子,它由一个或多个由α-氨基酸残基组成的长链条组成。 蛋白质是组成人体一切细胞、组织的重要成分。机体所有重要的组成部分都需要有蛋白质的参与。一般说,蛋白质约占人体全部质量的18%,最重要的还是其与生命现象有关。 蛋白质(protein)是生命的物质基础,是有机大分子,是构成细胞的基本有机物,是生命活动的主要承担者。没有蛋白质就没有生命。氨基酸是蛋白质的基本组成单位。它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。蛋白质占人体重量的16%~20%,即一个60kg重的成年人其体内约有蛋白质9.6~12kg。人体内蛋白质的种类很多,性质、功能各异,但都是由20多种氨基酸(Amino acid)按不同比例组合而成的,并在体内不断进行代谢与更新。

ml

ML,monolayer的缩写,是覆盖度的单位。

 
相关新闻
长期喝柠檬水的坏处 每天喝柠檬水有什么好处和坏处? 08-19
相关产品

大家都在看