首页 >  知识中心 >  新闻详情

伊红染液配制方法 瑞氏染色的染液配制

来源:朵拉利品网  |  2021-04-13 03:10:59

1, 瑞氏染色的染液配制



用 甲醇作瑞氏 染料溶剂,即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶剂,有两种作用:
( 1 )甲醇使瑞氏染料中美蓝( M )与伊红( E )在溶液中离解,可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。 在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青,美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色,但不能使胞浆染为蓝色,多余 美蓝就可以 使胞浆染成蓝色,染色主要是化学作用,是离子彼此结合的反应。
( 2 )甲醇具有强大的脱水力,可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积,提高细胞对染料吸收作用,同时由于甲醇吸附染色液中的水,使染色液升温,加速染色反应。
瑞氏染液配制:
瑞氏染料 830gm 或 1g
甲醇( AR ) 500ml 或 600ml
先称干燥(事先放入温箱干燥过夜)瑞氏染料放置乳钵内, 用乳棒轻轻 敲碎染料成粉末,再行研磨至听不到 研芝麻声 即呈细粉末,加少许甘油或甲醇溶解研磨,使染料在乳缸内显“一面镜”光泽,而无染料粉粒沉着,再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮,静置片刻,将上层液体倒入 一 清洁储存瓶内(最好用甲醇空瓶),再加甲醇研磨,重复数次,直至乳钵内染料及甲醇用完为止,摇匀,密封瓶口,存室温暗处,储存愈久,则染料溶解、分解就越好,一般储存 3 个月以上为佳。 1) 缓冲液作用:染色对氢离子浓度是十分敏感的,据观察 pH 值的改变,可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。 缓冲液须保持 一定的 pH 使染色稳定, PBS 的 pH 一般在 6.4~6.8 ,偏碱性染料可与缓冲液中 酸基起 中和作用,偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用,使 pH 恒定。
2) 缓冲液配制( pH6.4~6.8 ,弱酸性):
配方 1 : 配方 2 :
1% KH 2 PO 4 30ml M/15 KH 2 PO 4 73.5 ml
1% Na 2 HPO 4 20ml M/15 Na 2 HPO 4 26.5ml
H 2 O( 新鲜 ) 加至 1000ml
置室温黑暗处,瓶口密封,防止霉菌污染,如有污染则应报废。
搜狗问问
(pH6.4~6.8,弱酸性):
配方1 : 配方2:
1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml
1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml
H2O(新鲜) 加至1000ml
置室温黑暗处,瓶口密封,防止霉菌污染,如有污染则应报废。
姬姆萨(Giemsa"s stain;天青-伊红)染色
1.姬姆萨染料是伊红(AzurII Eqsin)和天青(蓝)2号合成的。
2.姬姆萨染料( Giemsa, 天青-伊红)染液配制:
姬姆萨染料(粉末) 0.5g或7.5g
甲醇(AR) 33ml 或500ml
甘油(AR) 33ml或 500ml
●先将姬姆萨染料放入乳钵中,逐渐倒甘油研磨溶于甘油中,置于56℃水温箱内,90~120分钟,然后加入甲醇,摇匀后放置数天,过滤后或不过滤即可使用。此染液放置室温阴暗处,时间越长越好。
●使用染液可临时配置):姬姆萨染液1ml,加DDH2O10ml混匀。即可使用。

1.培养基成分
乳糖 1g胰蛋白胨 0.5g NaCl 0.5g K2HPO4 2g2%伊红溶液 2ml0.5%美蓝溶液 1ml琼脂 1.5~2g蒸馏水 100ml自然pH或pH 7.2
2.配制方法
(1)称量 称取培养基各成分所需量。
(2)溶化 在烧杯中加入约2/3所需水量,依次逐一溶化培养基各成分。
(3)定容。
(4)调pH。
(5)按每100ml培养基加入2ml 2%伊红溶液和1ml 0.5%美蓝溶液。
(6)加琼脂 加热融化并补足失水。
(7)分装、加塞、包扎。
(8)高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。

名词解释


伊红

伊红(eosin)为酸性染料,将细胞质和细胞间质染为粉红色·切片在染色前需要脱蜡,染色后用中性树胶或DPX封片,以便长期保存 ,伊红是一种红色酸性染料.在微生物学实验中,用于鉴别产酸性细菌的一种培养基添加剂。 2017年10月27日,世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考,伊红在3类致癌物(尚无足够证据确定是否致癌)清单中。

 
相关新闻
长期喝柠檬水的坏处 每天喝柠檬水有什么好处和坏处? 08-19
甲基红溴甲酚绿混合指示剂 甲基红一溴甲酚绿混合指示剂的配制方法? 04-02
相关产品

大家都在看