伊红染液配制方法 瑞氏染色的染液配制

1, 瑞氏染色的染液配制

用 甲醇作瑞氏 染料溶剂，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用：
( 1 )甲醇使瑞氏染料中美蓝（ M ）与伊红（ E ）在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。 在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞浆染为蓝色，多余 美蓝就可以 使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子彼此结合的反应。
( 2 )甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。
瑞氏染液配制：
瑞氏染料 830gm 或 1g
甲醇（ AR ） 500ml 或 600ml
先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内， 用乳棒轻轻 敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到 研芝麻声 即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着，再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入 一 清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，直至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口，存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存 3 个月以上为佳。 1） 缓冲液作用：染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察 pH 值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。 缓冲液须保持 一定的 pH 使染色稳定， PBS 的 pH 一般在 6.4~6.8 ，偏碱性染料可与缓冲液中 酸基起 中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使 pH 恒定。
2） 缓冲液配制（ pH6.4~6.8 ，弱酸性）：
配方 1 ： 配方 2 :
1% KH 2 PO 4 30ml M/15 KH 2 PO 4 73.5 ml
1% Na 2 HPO 4 20ml M/15 Na 2 HPO 4 26.5ml
H 2 O（ 新鲜 ） 加至 1000ml
置室温黑暗处，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染则应报废。

(pH6.4~6.8，弱酸性)：
配方1 ： 配方2:
1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml
1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml
H2O（新鲜） 加至1000ml
置室温黑暗处，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染则应报废。
姬姆萨（Giemsa"s stain；天青-伊红）染色
1.姬姆萨染料是伊红（AzurII Eqsin）和天青（蓝）2号合成的。
2.姬姆萨染料（ Giemsa， 天青-伊红）染液配制：
姬姆萨染料（粉末） 0.5g或7.5g
甲醇（AR） 33ml 或500ml
甘油（AR） 33ml或 500ml
●先将姬姆萨染料放入乳钵中，逐渐倒甘油研磨溶于甘油中，置于56℃水温箱内，90~120分钟，然后加入甲醇，摇匀后放置数天，过滤后或不过滤即可使用。此染液放置室温阴暗处，时间越长越好。
●使用染液可临时配置）：姬姆萨染液1ml，加DDH2O10ml混匀。即可使用。

1.培养基成分
乳糖 1g胰蛋白胨 0.5g NaCl 0.5g K2HPO4 2g2%伊红溶液 2ml0.5%美蓝溶液 1ml琼脂 1.5~2g蒸馏水 100ml自然pH或pH 7.2
2.配制方法
(1)称量 称取培养基各成分所需量。
(2)溶化 在烧杯中加入约2/3所需水量，依次逐一溶化培养基各成分。
(3)定容。
(4)调pH。
(5)按每100ml培养基加入2ml 2%伊红溶液和1ml 0.5%美蓝溶液。
(6)加琼脂 加热融化并补足失水。
(7)分装、加塞、包扎。
(8)高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。

名词解释

伊红

伊红(eosin)为酸性染料，将细胞质和细胞间质染为粉红色·切片在染色前需要脱蜡，染色后用中性树胶或DPX封片，以便长期保存 ，伊红是一种红色酸性染料．在微生物学实验中，用于鉴别产酸性细菌的一种培养基添加剂。 2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考，伊红在3类致癌物（尚无足够证据确定是否致癌）清单中。