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茚三酮法测定氨基酸 茚三酮显色法测定氨基酸含量的步骤?

来源:朵拉利品网  |  2021-04-19 22:31:06

1, 茚三酮显色法测定氨基酸含量的步骤?



茚三酮显色法步骤:
1.标准曲线的制作 分别取0.3mmol/L 的标准氨基酸溶液0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mL 于试管中,用水补足至1mL。各加入1mL pH5.4,2mol/L 醋酸缓冲液;再加入1mL 茚三酮显色液,充分混匀后,盖住试管口,在100℃水浴中加热15min,用自来水冷却。放置5min 后,加入3mL60%乙醇稀释,充分摇匀,用分光光度计测定OD570nm。(脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应呈黄色,应测定OD440nm)。
以OD570nm 为纵坐标,氨基酸含量为横坐标,绘制标准曲线。
实验室培养箱(CO2 培养箱) 生物帮上面有这方面的详细的介绍。

2, 茚三酮比色法 氨基酸含量的测定



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茚三酮显色法测定氨基酸含量
原理
茚三酮溶液与氨基酸共热,生成氨。氨与茚三酮和还原性茚三酮反应,生成紫色化合物。该化合物颜色的深浅与氨基酸的含量成正比,可通过测定570nm处的光密度,测定氨基酸的含量。试剂与材料
1.标准氨基酸溶液:配制成0.3mmol/L溶液。
2.pH5.4,2mol/L醋酸缓冲液:量取86mL 2mol/L醋酸钠溶液,加入14mL 2mol/L乙酸混合而成。用pH检查校正。
3.茚三酮显色液:称取85mg茚三酮和15mg还原茚三酮,用10mL乙二醇甲醚溶解。
茚三酮若变为微红色,则需按下法重结晶:称取5g茚三酮溶于15~25mL热蒸馏水中,加入0.25g活性炭,轻轻搅拌。加热30min后趁热过滤,滤液放入冰箱过夜。次日析出黄白色结晶,抽滤,用1mL冷水洗涤结晶,置干燥器干燥后,装入棕色玻璃瓶保存。
还原型茚三酮按下法制备:称取5g茚三酮,用125mL沸蒸馏水溶解,得黄色溶液。将5g维生素C用250mL温蒸馏水溶解,一边搅拌一边将维生素C溶液滴加到茚三酮溶液中,不断出现沉淀。滴定后继续搅拌15min,然后在冰箱内冷却到4℃,过滤、沉淀用冷水洗涤3次,置五氧化二磷真空干燥器中干燥保存,备用。
乙二醇甲醚若放置太久,需用下法除去过氧化物:在500mL乙二醇甲醚中加入5g硫酸亚铁,振荡1~2h,过滤除去硫酸亚铁,再经蒸馏,收集沸点为以

名词解释


茚三酮

茚三酮,近似为白色结晶,或浅黄色结晶粉末,微溶于乙醚及三氯甲烷,100℃以上变为红色。用于鉴定氨基酸,反应十分灵敏,是鉴定氨基酸的最简便方法。

培养箱

培养箱,具有制冷和加热双向调温系统,温度可控的功能,是植物、生物、微生物、遗传、病毒、医学、环保等科研,教研`教育部门不可缺少的实验室设备,广泛应用于低温恒温试验、培养试验、环境试验等等。

 
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