1, 芽孢染色法
一、目的要求学习并掌握芽孢染色法。二、基本原理芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性染料，如孔雀绿（malachite green）或碱性品红（basicfuchsin）在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如番红液）或衬托溶液（如黑色素溶液）处理，则菌体和芽孢易于区分。三、器材枯草芽孢杆菌，蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus），生孢梭菌（Clostridium sporogenes）;孔雀绿染液，番红水溶液，苯酚品红溶液，黑色素溶液等。四、操作步骤方法1、(1)将培养24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌，作涂片、干燥、固定。(2)滴加3—5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。(3)用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必e68a847a686964616f31333234303761要时可添加少许染液。加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约4—5分钟。这一步也可不加热，改用饱和的孔雀绿水溶液（约7.6%）染10分钟。(4)倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。(5)用番红水溶液复染1分钟，水洗。(6)待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。方法2、(1)取二支洁净的小试管，分别加入0.2ml无菌水，再往一管中加入1—2接种环的蜡状芽孢杆菌的菌苔，另一管中加入1—2接种环的生孢梭菌的菌苔，两管各自充分混合成浓厚的菌悬液。(2)在菌悬液中分别加入0.2ml苯酚品红溶液，充分混合后，于沸水浴中加热3—5分钟。(3)用接种环分别取上述混合液2—3环于两片载玻片上，涂薄，风干后，将载玻片稍倾斜于烧杯上，用95%乙醇冲洗至无红色液流出。(4)再用自来水冲洗，滤纸吸干。(5)取1—2接种环黑色素溶液于涂片处，立即展开涂薄，自然干燥后，油镜观察，在淡紫灰色背景的衬托下，菌体为白色，菌体内的芽孢为红色。五、实验报告1.结果绘图表示你观察到的两种芽孢杆菌的芽孢在形状、大小、着生位置上有什么不同？2.思考题为什么在孔雀绿染色液加热染色中，要待玻片冷却后才能用水冲洗？
2, 苏云金芽孢杆菌的所有知识点
病原形态特征在牛肉膏蛋白胨固体培养基上30℃条件下培养，不同时间取样，染色后显微镜下观察。B-Hm-16营养体细胞为杆状，较为粗壮，大小为1. 2~1. 5μm*3. 6~4. 5μm；培养30h可形成较营养体更为粗壮的芽孢囊，染色后可以看到一端着深红色，另一端不着色；培养36~38h芽孢囊破裂，释放出卵圆形的孢和钝菱形的晶体，晶体大小为1. 0~1. 2μm*1~2. 0μm。[生理生化特征苏云金芽孢杆菌WY-197在LB液体培养基中生长良好，可正常产生芽孢和伴孢晶体，平均生长周期为24 h。其中1~8 h为潜伏期，pH值基本不变；8~12 h为对数生长期，pH值迅速下降、到对数末期又迅速回升；12~18 h为孢子囊发育期，pH缓慢上升；18~24 h为芽孢形成期，随着芽孢和晶体逐渐脱落，pH值上升至最高，但在伴孢晶体完全脱落后，pH值略有下降。生防特点苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis，简称Bt）是目前产量最大、使用最广的生物杀虫剂。它的主要活性成分是一种或数种杀虫晶体蛋白（insecticidal crystal proteins,ICPs），又称δ-内毒素，对鳞翅目、鞘翅目、双翅目、膜翅目、同翅目等昆虫，以及动植物线虫、蜱螨等节肢动物都有特异性的毒杀活性，而对非目标生物安全因此，Bt杀虫剂具有专一、高效和对人畜安全等优点目前苏云金杆菌商品制剂已达100多种，是世界上应用最为广泛、用量最大、效果最好的微生物杀虫剂，因而倍受人们关注。但是，商品Bt制剂在生产防治中也显示出某些局限性，如速效性差、对高龄幼虫不敏感、田间迟效期短以及重组工程菌株遗传性状不稳定等都已成为影响Bt进一步成功推广使用的制约因素。因此，为了提高Bt制剂的杀虫效果，对其增效途径的研究已成为世界性的研究热点，主要包括：筛选增效菌株；利用化学添加剂、植物它感素、几丁质酶作为增效物质；昆虫病原微生物间的互作增效等。
名词解释
芽孢
芽孢（英文名：spore），是某些特殊种群的细菌，主要是芽孢杆菌属Bacillus与梭菌属Clostridium中细菌产生的特殊休眠体，有极强的抗逆性，对热、碱、酸、高渗以及辐射均有强耐受性。普通的巴斯德消毒法无法杀灭芽孢，通常使用的杀灭芽孢的方法为高压灭菌。一个细菌产生一个芽孢，条件适宜时重新成为一个细菌，数量没有增加，因此芽孢不是细菌的繁殖体。
孔雀绿
孔雀绿亦称“法翠”，也叫翡翠釉或吉翠釉。釉色分深浅两种。在陶瓷彩釉方面，孔雀绿是一种以铜为着色剂的低温色釉，宋、元时期的民窑创烧，最早见于宋代磁州窑。
