血凝实验实验报告 血凝实验实验报告

2, 血凝和血凝抑制试验具体怎样操作和判定结果？

血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验具体操作和结果判定程序如下：
(1)材料准备
a.96孔V型微量反应板，微量移液器（配有滴头）。b.配制阿氏（Alsevers）液、鸡血红细胞悬液。c.pH7.2的0.01摩尔/升磷酸盐缓冲液（PBS）。d.高致病性禽流感病毒血凝素分型抗原和标准分型血清以及阴性血清。
(2)操作方法
①血凝（HA）试验（微量法）
a.在微量反应板的1~12孔均加入0.025毫升PBS，换滴头。
b.吸取0.025毫升抗原加入第1孔，混匀。
c.从第1孔吸取0.025毫升抗原加入第2孔，混匀后吸取0.025毫升加入第3孔，如此进行对倍稀释至第11孔，从第11孔吸取0.025毫升弃之，换滴头。
d.每孔再加入0.025毫升PBS。
e.每孔均加入0.025毫升1%(V/V)鸡红细胞悬液（将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入）。
f.振荡混匀，在室温（20~25℃）下静置40分钟后观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下1小时）。对照孔红细胞将呈明显的纽扣状沉到孔底。
g.结果判定。将板倾斜，观察红细胞有无呈泪滴状流淌。完全血凝（不流淌）的抗原或病毒最高稀释倍数代表一个血凝单位（HAU）。
②血凝抑制（HI）试验（微量法）
a.根据血凝试验结果配制4HAU的病毒抗原。以完全血凝的病毒最高稀释倍数作为终点，终点稀释倍数除以4即为含4HAU的抗原的稀释倍数。例如，如果血凝的终点滴度为1∶256，则4HAU抗原的稀释倍数应是1∶64(256除以4)。
b.在微量反应板的1~11孔加入0.025毫升PBS，第12孔加入0.05毫升PBS。
c.吸取0.025毫升血清加入第1孔内，充分混匀后吸0.025毫升于第2孔，依次对倍稀释至第10孔，从第10孔吸取0.025毫升弃去。
d.1~11孔均加入含4HAU混匀的病毒抗原液0.025毫升，室温（约20℃）静置至少30分钟。
e.每孔加入0.025毫升的鸡红细胞悬液轻轻混匀，静置约40分钟（室温约20℃，若环境温度太高可置4℃条件下1小时），对照红细胞将呈明显的纽扣状沉于孔底。
(3)结果判定
以完全抑制4个HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。
只有阴性对照孔血清滴度不大于2log2，阳性对照孔血清误差不超过1个滴度，试验结果才有效。HI价小于或等于3log2判定HI试验阴性；HI价等于4log2为阳性。

3, 血凝实验的间接Coombs试验

Coombs试验除了广泛应用于血液病的检测外，还可采用专一特异性的抗球蛋白的血清如IgG血清、抗IgA或抗IgM以及抗补体血清等，分析结合于红细胞上的不完全抗体的免疫球亚类。
有些病毒具有凝集某种（些）动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的试验称血球凝集（HA）试验，以此来推测被检材料中有无病毒存在，是非特异性的，但病毒的凝集红细胞的能力可被相应的特异性抗体所抑制，即血球凝集抑制（HI）试验，具有特异性。通过HA-HI试验，可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。 [目的要求]
掌握病毒HA和HI试验的原理和基本操作方法，了解其实用价值。
[材料与试剂]
1. 96孔“U”形或“V”形微量反应板，50L定量移液器，滴头，微型振荡器。
2. 生理盐水，0.5% 鸡红细胞悬液。
3. 新城疫病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），新城疫阳性血清，被检鸡血清。
[实验内容及操作方法] 1. 在96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加50L生理盐水。
2. 于左侧第1孔加50L病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），混合均匀后，吸50L至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50L；第12孔为红细胞对照。
3. 自右至左依次向各孔加入0.5% 鸡红细胞悬液50L，在振荡器上振荡，室温下静置后观察结果（表4-1）。
表 4-1 病毒血凝试验的操作方法（单位：L）
孔 号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
病毒稀释度 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 1:2048 对照
生理盐水 50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
病毒液 50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
0.5%红细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
弃50
结果观察 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ +++ + + - -
4. 结果判定：
从静置后10 min开始观察结果，待对照孔红细胞已沉淀即可进行结果观察。红细胞全部凝集，沉于孔底，平铺呈网状，即为100% 凝集（++++），不凝集者（-）红细胞沉于孔底呈点状。
以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位。从表4-1看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:128，则l:128为1个血凝单位，1:64、l:32分别为2、4个血凝单位，或将128/4=32，即1:32稀释的病毒液为4个血凝单位。
名词解释

血液

血（blood），全称血液，是在心脏和血管腔内循环流动的不透明红色液体。 血属于结缔组织，由血浆和血细胞组成。血浆内含血浆蛋白（白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原）、脂蛋白等营养成分及无机盐、氧、激素、酶、抗体和细胞代谢产物等；血细胞有红血球、白血球和血小板。生物体的生理变化和病理变化往往会引起血成分的改变。

凝血

凝血（Blood Coagulation），即：血液凝固，是指血液由流动的液体状态变成不能流动的凝胶状态的过程，是生理性止血的重要环节。血液凝固的实质就是血浆中的可溶性纤维蛋白原变成不可溶的纤维蛋白的过程。

凝固

物质从液态变为固态叫凝固。凝固时要放热。 晶体凝固的条件：1.温度达到凝固点；2.达到凝固点后继续放热。