在ELISA实验前的注意事项
1仔细阅读说明书
2确定试剂盒在有效期内
3按说明书确定所有试剂齐全(数量、体积)
4标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份。短期内无法实验者,注意低温保存
5准备好所有实验额外所需物品,如试管、吸头、移液器、离心机等
6根据检测标本数量确定所需试剂的量
7按说明书将所用试剂平衡至室温,配制所需试剂
DIY夹心法ELISA常见技术指南:
1、选择抗体时最好选择一个单抗和一个多抗进行配对;若选择两个单抗,必须识别不同表位的抗体;最好从同一家公司选择抗体对。
2、ELISA实验中为了确定最佳信号和最低背景应将捕获抗体(0.5-4μg/ml)和检测抗体(0.25-2μg/ml)在预实验中进行彼此相抗的滴定。同时,应包括在适当范围内的标准品的系列稀释。按试剂说明书常规提供的范围进行操作。
3、标准品的配制:对于每种细胞因子应仔细阅读说明书,注意每批的细节。在使用细胞因子前,瞬时离心试剂瓶,尽可能多地收回其中的细胞因子。根据每批说明书中的细节,将冻干的细胞因子复溶。
4、一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml到15pg/ml。可利用标准的ELISA操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。
5、为了优化灵敏度,建议过夜孵育标准品和标本。
6、若使用过氧化物酶作为显色系统,应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠,叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。
7、当测定混合液体中的抗原时,如血清,建议在标本稀释液中加不相干的Ig.
(注:本试剂只用于科研,欢迎来电咨询!)
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白介素
白细胞介素即是由多种细胞产生并作用于多种细胞的一类细胞因子。目前至少发现了38个白细胞介素,分别命名为IL-1~IL38,功能复杂,成网络,复杂重叠;在免疫细胞的成熟、活化、增殖和免疫调节等一系列过程中均发挥重要作用,此外它们还参与机体的多种生理及病理反应。免疫系统细胞的增殖、分化和功能受到一系列细胞因子的调节。根据细胞因子的结构同源性可将其分为几个蛋白质家族,如IL-1家族、IL-6家族、IL-10家族、肿瘤坏死因子家族和造血因子家族等。白细胞介素穿插归类为其中。
试剂盒
试剂盒是用于盛放检测化学成分、药物残留、病毒种类等化学试剂的盒子。一般医院、制药企业使用。
IL
IL是.NET框架中中间语言(Intermediate Language)的缩写。使用.NET框架提供的编译器可以直接将源程序编译为.exe或.dll文件,但此时编译出来的程序代码并不是CPU能直接执行的机器代码,而是一种中间语言IL(Intermediate Language)的代码。