1, 菌种怎么制作？
培育双孢菇三级菌种多以麦粒为原料，在实际生产中发现污染率较高，或出现异常现象，究其原因，就是菌种生产操作的不规范所致。现提出具体规范操作技术，供菇农朋友参考。 1.原料处理：牛粪破碎处理后过筛，按1∶1.2加水拌匀，堆积发酵，每天翻堆一次，约20天左右，牛粪粉变为褐色、具有正常发酵草料的清香气味，晒干备用。无受潮的小麦，充分泡透后捞出，适当遮阴、通风，发现表皮发干时，轻喷细雾湿润，24小时后即可发芽，待麦芽长至1~2厘米时，即可使用。如果有虫蛀麦粒，也可使用，但虫蛀后的麦粒有孔洞，淀粉易流出，所以，必须多清洗几遍；然后倒入pH值8~9的石灰水中，浸泡6小时后煮20分钟左右，至麦粒无白心时，捞出麦粒，冷水冲洗后即可。2.基本配方：麦粒（以干品计）100公斤、牛粪粉30公斤、石膏粉1公斤、碳酸钙1.5公斤。3.基质混合：将麦粒与牛粪粉按1∶0.2比例混合，并同时拌入其他辅料，注意使牛粪全部粘附到麦粒上，水分不足时适量喷水。剩余牛粪粉待用。4.装瓶操作：一般小批量生产多不采用标准瓶，而利用酒瓶、葡萄糖玻璃瓶等，装瓶灭菌。为降低生产成本，可用500毫升输液瓶。先装一把牛粪粉在瓶底，约1~1.5厘米厚，再装麦粒，装瓶时稍蹾瓶，使麦粒至瓶肩以下1厘米处，然后，再装入1~2把牛粪粉，并用“L”形工具将之摊平、压实，之后塞入棉塞。5.灭菌冷却：采用高压灭菌方法，压力维持在0.15兆帕，保持2~2.5小时。灭菌结束后，压力下降至零后，可取出料瓶，移入冷却室或接种室，室内提前3天清理干净，并喷洒百病傻溶液，料瓶降温至30℃时即可接种。6.接种操作：室内喷洒一遍赛百09溶液后，将原种用75%酒精擦洗一次，打开接种净化机，10分钟后即可开始接种操作。每瓶（500毫升）原种可接40瓶以上。7.发菌培养：培养室（棚）提前清理卫生，地面灌水，地毯式喷洒百病傻溶液，密闭2天后，地面撒施石灰粉，即可将接种后的菌种移入。发菌期间，尽量控制培养室温度在25℃左右，不超过28℃，安装水温空调的最低可降至22℃左右，一般农户不具备条件，可采用土法降温：发菌棚内地面上用砖码起20厘米高，铺上新塑料膜，将菌种瓶立式排入，灌入地下水，每天换水1~2次，即可使菌瓶内保持25℃以下。每3天左右喷洒一次药物以作预防，可采用百病傻与赛百09交替施用；发现有菇蚊类成虫时，随即喷施高效氯氰菊酯予以杀灭。8.剔杂处理：接种后第三天，即开始检查剔杂，发现任何非双孢菇菌丝的菌瓶，随即移出室外，有链孢霉菌污染的，应用方便袋从上往下套住菌瓶，慢慢移出。对一般杂菌的污染，可喷施药物后将料倒出，晒干后再次利用；对链孢霉菌污染，应远离培养室倒料，并予焚烧或深埋，空瓶用70℃以上热水烫杀，洗净后再用。9.暂时保存：约经35~45天，菌种完成发菌，暂时不用的菌种，应予低温存放，一般保持2℃~4℃条件即可。10.质量检验：双孢菇的菌丝浓白、清晰，生长有力，呈扇形生长，绒毛状菌丝多、整齐，气生菌丝洁白；现在采用最多的“2796”属半气生型品种，其菌丝旺盛、一致；没有黄白色厚菌被；菌丝浓白粗壮，遇高温时微黄、可出现少量束状菌丝，上下均匀一致。瓶内菌丝生长不健壮、呈散乱状态，或有“退菌”、断菌”现象，料转色、结块或干缩，出现白色、浅黄色圆形块状物或不规则暗斑，有杂菌和螨类滋生，无蘑菇香味，具漂白粉或腥臭味等，均为不合格菌种。若菌丝呈淡黄白色，且菌丝萎缩，生长无力，或生长中就有菌被形成，则为培养基较湿或较老的菌种；菌种瓶内上部菌丝收缩变干，下部菌丝生长尚好，为培养基过干，培养温度过高；如果生长不均匀，表明麦粒浸泡和预煮时间不够；若生长中菌丝渐变黄，表明培养温度过高；若菌种瓶内上方出现很厚的菌被，是生产性能差或生理性状老化的菌种，不宜使用。一直在高温条件下培养的菌种，播种后不易吃料，发菌慢。
2, 蘑菇的菌种是怎样制作的
食 用 菌 制 种 技 术 江苏新沂市康原食用菌研究所 TEL:0516-88939450（一）母种的制备 用试管制成斜面培养基，并接种原始试管种（保留种，并用于生产的母种）即为生产母种，可用于扩接原种。 1. 培养基配方 配方一 马铃薯培养基（PDA）马铃薯200克 蔗糖20克 琼脂20克 水1000毫升配方二 综合马铃薯培养基 马铃薯 200克 葡萄糖20克 磷酸氢二钾3克 硫酸镁1.5克 维生素B1 10毫克 琼脂20克 水1000毫升 PH值自然 配方三 合成培养基 马铃薯 20克 葡萄糖20克 磷酸二氢钾2克 蛋白胨5克 酵母膏5克 硫酸镁1克 水1000毫升 PH值自然 2.培养基制作方法 先将马铃薯洗净去皮（挖去芽眼） 切成簿片，称取200克，加水1000毫升，煮沸15—20分钟，用4层纱布过滤，取其滤液补足水至1000毫升，加入琼脂20克，再加热，琼脂溶化后，再加入其它药品。 培养基的分装，应在培养基凝固前进行（琼脂培养基40℃凝固）一般用漏斗，或分装瓶，下端连接一段软橡皮管，橡皮管下面再连接一段玻璃管，在橡皮管上安装一个止水弹簧夹，分装时将玻璃管插入试管内，但不要碰到管壁，装入量为试管长度1/4。装好后塞上棉塞，用线绳捆扎起来，棉塞部分用报纸包扎。 3.灭菌 将试管直立放入高压蒸气灭菌锅，在0.11MPa/C㎡压力下（锅入温度达121℃）灭菌30-35分钟，使微生物包括芽孢全部杀死。待压力降到0时，慢慢放出锅内气体，趁培养基没有凝固时，将试管摆成斜面。 4.接种、培养 通过无菌操作方法将菌种接入试管斜面上，置28℃、3天后将温度降至24℃继续培养，7—15天左右，菌丝长满整个试管斜面，即成（生产）母种。 （二）原种、制备 母种接种到原种培养基上，进行扩大繁殖育种即为原种，原种一般采用广口瓶或袋装。 1.培养基配方 配方一 木屑麸皮培养基 阔树木 78% 麸皮 20% 糖 1% 石膏粉 1% 配方二 棉籽壳木屑培养基 棉籽壳 80% 木屑15% 糖 1% 麸皮 5% 过磷酸钙 3% 石膏粉 1% 2.拌料与装袋 选用新鲜无霉变原料，充分混匀，加水比例为1:1.3左右拌匀，总含水量60%-63%。含水量以手紧握培养料指缝间有水欲滴为宜。堆闷30分钟后，装瓶（袋）。用机械或人工装袋稍加压实，袋口用无棉盖体封口。 3.灭菌 灭菌方法有两种，高压灭菌和常压灭菌。高压灭菌又称加压蒸气灭菌，灭菌原理：在高温（121℃以上）、高压（0.11MPa/C㎡）条件下灭菌2小时，将芽孢在内的微生物全部杀死。常压灭菌称流通蒸气灭菌，由于灭菌设备、条件和基本因素的不同，温度变动在95-105℃之间，其热力、穿透力不强，在一定温度下要维持足够时间才能达到灭菌目的，通常在100℃下维持10-12小时。 4.接种与培养 不论用接种箱或接种室接种，在接种前，需对接种箱或接种室用0.2%的来苏水或漂白粉进行消毒处理，然后将灭菌过的料瓶（袋）放在箱内，用烟雾剂密闭薰蒸消毒。接种室消毒，一间房需点燃3盒50克规格烟雾剂；接种箱消毒每次用4克，一支母种试管可接4—6瓶（袋）原种。将接种后的菌种瓶（袋）放入发菌室黑暗处培养。培养室温度22-26℃，相对湿度70%以下，发菌期间应保持良好的通风条件。原种从接种到菌丝长满瓶（袋）需30—40天。 （三）栽培种制备 原种进一步扩繁，即为栽培种。栽培种一般采用塑料袋制备，用无棉盖体封口。一瓶原种可接50-60瓶（袋）栽培种。栽培种培养基配方及拌料、装袋、灭菌、接种、发菌管理与原种相同。
相关概念
灭菌
采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施，称为灭菌。灭菌常用的方法有化学试剂灭菌、射线灭菌、干热灭菌、湿热灭菌和过滤除菌等。可根据不同的需求，采用不同的方法，如培养基灭菌一般采用湿热灭菌，空气则采用过滤除菌。 灭菌的彻底程度受灭菌时间与灭菌剂强度的制约。微生物对灭菌剂的抵抗力取决于原始存在的群体密度、菌种或环境赋予菌种的抵抗力。灭菌是获得纯培养的必要条件，也是食品工业和医药领域中必需的技术。
培养基
培养基（Medium）是供微生物、植物组织和动物组织生长和维持用的人工配制养料，一般含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）、维生素和水等，有的还含有抗菌素、色素、激素和血清。培养基由于配制的原料不同、使用要求不同，而贮存保管方面也稍有不同；液体培养基不易长期保管，均改制成粉末。
接种
接种（inoculate/vaccinate）意为注射疫苗以预防疾病。微生物学术语，食用菌栽培学术语：接种 inoculation ，按无菌操作技术要求将目的微生物移接到培养基质中的过程。
