赫氏苏木精染液配制 急求苏木精染液配制方法

1, 急求苏木精染液配制方法

1.传统方法：（1）Harris苏木素
配方：
苏木素 1g 无水乙醇 10ml
蒸馏水 200 ml 钾明矾 20g
HgO 0.5g
先将苏木素溶于无水乙醇中，备用。把明矾 放入蒸馏水，加热溶解，再加入备用的苏木素，煮沸2分钟，先假如少量的氧化贡，防止氧化过程中苏木素外淤，玻璃搅拌，然后，边搅拌边加入氧化汞。加完后，立即遗至冰水中，加速其冷却，静置一夜后，过滤。用前以5%的比例加入冰醋酸。如配好后时间较长，冰醋酸的量可适当多加一点。冰醋酸可直接影响苏木素的着色能力和清晰度。加少了，会造成核浆共染，背景不干净。加多了，核着色能力下降。此液可放置3月至半年左右，视气温而定。使用期要看染色的切片量来定，以1天100张片量，可使用半个月左右。
2.改良的苏木精染色液配制方法
苏木精染液配制方法虽然很多，但都有其局限性，大多医院沿用哈瑞氏苏木精染液，此液优点是染色力强，配后即可使用。其缺点是配制较麻烦，危险性较高，须具有丰富经验技师配制。加入黄色氧化汞时如过快则反应过于激烈，可使液体溢出，有时可呈喷射状，容易使操作者受到伤害。温度过低时，苏木精氧化不充分，会影响其染色力，须适当地掌握反应程度。极易形成沉淀、结晶和氧化膜，尤其室温较低时，更加显著，需经常过滤。使用及保存时间较短，一般数月即失效，如染色较多很快失去染色力，现苏木精价格比从前增长了几十倍，造成极大的浪费。
1 材料与方法
1.1 材料 苏木精2g，无水乙醇250ml，硫酸铝10g，蒸馏 水750ml，碘酸钠0.5g，柠檬酸1g。
1.2 方法 将苏木精溶于无水乙醇，将硫酸铝溶于水，两液混合加热煮沸2min，加入碘酸钠及柠檬酸。
2 结果
经比较，此液存放时间长，染色力保持时间长，染色效果好。
3 讨论
用硫酸铝替代钾明矾染液久放也不会产生沉淀、结晶，不用过滤即可使用。此液存放时间长，染色力保持时间长，经过我室比较，使用时间可比哈瑞氏苏木精染液长一倍。1g苏木精配置的染液是哈瑞氏苏木精染液的两倍，更加经济实用。
此液染色效果好，染色时间3~8min，特别是染色质显色清晰，但应注意一些染色技巧，配置盐酸酒精分化液时，浓度稍低，一般控制在0.8%左右，分化时间稍短，应在30s之内。氨水配制成1%，返蓝时间要较长，一般控制在1~2min，充分水洗后再进行下面的染色。
以上内容仅供参考！希望对你有帮助！！

3, 瑞氏染液的缓冲液配制

用 甲醇作瑞氏 染料溶剂，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用：
( 1 )甲醇使瑞氏染料中美蓝（ M ）与伊红（ E ）在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。 在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞浆染为蓝色，多余 美蓝就可以 使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子彼此结合的反应。
( 2 )甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。
瑞氏染液配制：
瑞氏染料 830gm 或 1g
甲醇（ AR ） 500ml 或 600ml
先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内， 用乳棒轻轻 敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到 研芝麻声 即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着，再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入 一 清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，直至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口，存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存 3 个月以上为佳。 1） 缓冲液作用：染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察 pH 值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。 缓冲液须保持 一定的 pH 使染色稳定， PBS 的 pH 一般在 6.4~6.8 ，偏碱性染料可与缓冲液中 酸基起 中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使 pH 恒定。
2） 缓冲液配制（ pH6.4~6.8 ，弱酸性）：
配方 1 ： 配方 2 :
1% KH 2 PO 4 30ml M/15 KH 2 PO 4 73.5 ml
1% Na 2 HPO 4 20ml M/15 Na 2 HPO 4 26.5ml
H 2 O（ 新鲜 ） 加至 1000ml
置室温黑暗处，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染则应报废。

革兰氏（Gram）染色液
1.草酸铵结晶紫染液
A液：结晶紫（crystal violet） 1g
95%酒精 20ml
B液：草酸铵（ammonium oxalate） 0.8g
蒸馏水 80ml
混合A、B二液，静置48小时后使用。
2.卢戈氏（Lugol）碘液
碘片 1.0g
碘化钾 2.0g
蒸馏水 300ml
先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘全溶后，加足水分即成。
3.95%的酒精溶液。
4.沙黄复染液
沙黄 0.25g
95%的酒精 10ml
蒸馏水 90ml
将沙黄溶于乙醇中，再用蒸馏水稀释。

名词解释

蒸馏水

蒸馏水是指经过蒸馏、冷凝操作的水，蒸二次的叫重蒸水，三次的叫三蒸水。 蒸馏水的制作是把源水煮沸后令其蒸发冷凝回收，要大量耗费热能，造价不会太低。

乙醇

乙醇（ethanol，结构简式CH3CH2OH或C2H6O）是醇类的一种，有机化合物，俗称酒精，是最常见的一元醇。 其在常温常压下是一种易燃、易挥发，且具有特殊香味（略带刺激）的无色透明液体，是常用的燃料、溶剂和消毒剂，也用于有机合成。乙醇与甲醚是同分异构体。