1, 茚三酮显色法测定氨基酸含量的步骤?
茚三酮显色法步骤:1.标准曲线的制作 分别取0.3mmol/L 的标准氨基酸溶液0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mL 于试管中,用水补足至1mL。各加入1mL pH5.4,2mol/L 醋酸缓冲液;再加入1mL 茚三酮显色液,充分混匀后,盖住试管口,在100℃水浴中加热15min,用自来水冷却。放置5min 后,加入3mL60%乙醇稀释,充分摇匀,用分光光度计测定OD570nm。(脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应呈黄色,应测定OD440nm)。以OD570nm 为纵坐标,氨基酸含量为横坐标,绘制标准曲线。实验室培养箱(CO2 培养箱) 生物帮上面有这方面的详细的介绍。
2, 求助 在用茚三酮法做氨基酸标准曲线时 为什么没有颜色呢?或者颜色...
可能原因:1、标准氨基酸含量太低2、反应温度未达到3、反应后未及时测量,搁置太久 1 茚三酮配制:称0.6g茚三酮,加入15毫升正丙醇,溶解。再加入30毫升正丁醇,60毫升乙二醇,最后加入PH5。4的乙醇-乙酸钠缓冲液9毫升,混匀,4摄氏度棕色试剂瓶保存,可保存十天。2 PH5。4的乙醇-乙酸钠缓冲液:54。4克乙酸钠加入100毫升无氨蒸馏水,加热至沸腾,使体积蒸发至60毫升左右。冷却,加入30毫升冰醋酸,用无氨蒸馏水定容至100毫升。3 氨基酸标液:称80摄氏度烘干的亮氨酸46。8毫克,用10%异丙醇定容至100毫升,为1毫摩尔/升的标准氨基酸储备液,冰箱保存。从中取5毫升,蒸馏水定容至50毫升,为5微克/毫升氨基酸标准液。4 氰化钠储备液:称取490毫克,溶于一升无氨蒸馏水,为0。01摩尔/升。5 10%乙酸6乙酸-氰酸盐缓冲液:0。01摩尔/升氰化钠20毫升,用乙醇-乙酸钠缓冲液定容至一升。7标线管号 1 2 3 4 5 6 氨基液标液(毫升)0 0。2 0。4 0。6 0。8 1无氨蒸馏水(毫升)2 1。8 1。6 1。4 1。2 1茚三酮(毫升) 3 3 3 3 3 3乙酸-氰酸盐缓冲液 0。5 0。5 0。5 0。5 0。5 0。5每管游离氨基酸含量(微克)0 1 2 3 4 5加完试剂后,沸水中加热15分钟,取后后迅速冷却,并不时摇动,呈现蓝紫色时,用60%乙醇定容至20毫升。摇匀,570纳米测定吸光度。计算:含量(微克/100克)=C*VT*100/(VS*W)C:从标线上查得的含量 微克VT:样品总体积 毫升VS:测定时取用的样品体积 毫升W:样品鲜重 克
3, 茚三酮比色法 氨基酸含量的测定
去百度文库,查看完整内容>内容来自用户:fc357893792茚三酮显色法测定氨基酸含量原理茚三酮溶液与氨基酸共热,生成氨。氨与茚三酮和还原性茚三酮反应,生成紫色化合物。该化合物颜色的深浅与氨基酸的含量成正比,可通过测定570nm处的光密度,测定氨基酸的含量。试剂与材料1.标准氨基酸溶液:配制成0.3mmol/L溶液。2.pH5.4,2mol/L醋酸缓冲液:量取86mL 2mol/L醋酸钠溶液,加入14mL 2mol/L乙酸混合而成。用pH检查校正。3.茚三酮显色液:称取85mg茚三酮和15mg还原茚三酮,用10mL乙二醇甲醚溶解。茚三酮若变为微红色,则需按下法重结晶:称取5g茚三酮溶于15~25mL热蒸馏水中,加入0.25g活性炭,轻轻搅拌。加热30min后趁热过滤,滤液放入冰箱过夜。次日析出黄白色结晶,抽滤,用1mL冷水洗涤结晶,置干燥器干燥后,装入棕色玻璃瓶保存。还原型茚三酮按下法制备:称取5g茚三酮,用125mL沸蒸馏水溶解,得黄色溶液。将5g维生素C用250mL温蒸馏水溶解,一边搅拌一边将维生素C溶液滴加到茚三酮溶液中,不断出现沉淀。滴定后继续搅拌15min,然后在冰箱内冷却到4℃,过滤、沉淀用冷水洗涤3次,置五氧化二磷真空干燥器中干燥保存,备用。乙二醇甲醚若放置太久,需用下法除去过氧化物:在500mL乙二醇甲醚中加入5g硫酸亚铁,振荡1~2h,过滤除去硫酸亚铁,再经蒸馏,收集沸点为以
名词解释
茚三酮
茚三酮,近似为白色结晶,或浅黄色结晶粉末,微溶于乙醚及三氯甲烷,100℃以上变为红色。用于鉴定氨基酸,反应十分灵敏,是鉴定氨基酸的最简便方法。
溶液
溶液是由至少两种物质组成的均一、稳定的混合物,被分散的物质( 溶质)以分子或更小的质点分散于另一物质(溶剂)中。物质在 常温时有固体、液体和气体三种 状态。因此溶液也有三种状态,大气本身就是一种气体溶液, 固体溶液混合物常称固溶体,如合金。一般溶液只是专指液体溶液。液体溶液包括两种,即能够导电的 电解质溶液和不能导电的 非电解质溶液。所谓 胶体溶液,更确切的说应称为 溶胶。其中,溶质相当于 分散质,溶剂相当于分散剂。在生活中常见的溶液有蔗糖溶液、碘酒、澄清石灰水、稀盐酸、盐水、空气等。
5g
5G,别称5G技术,是指第五代移动通信技术、蜂窝移动通信技术,中国三大运营商于2019年11月1日上线5G商用套餐。 5G的核心是表示声音和图像的模拟信号在手机中被数字化,由模数转换器转换并作为比特流传输,主要优势在于数据传输速率高,可满足高清视频、虚拟现实等大数据量传输。