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寡核苷酸引物 寡核苷酸引物的作用是什么?在PCR实验中的作用

来源:朵拉利品网  |  2019-06-28 18:02:45

1, 寡核苷酸引物的作用是什么?在PCR实验中的作用



PCR技术中的引物的本质和作用。
引物是一小段单链DNA或RNA,引物可以做为DNA复制开始时DNA聚合酶的结合位点,在细胞外的条件下,只有通过引物,DNA才可以开始进行复制。
引物是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。
启动子和引物两者的区别:
启动子是DNA分子上能与RNA聚合酶结合并形成转录起始复合体的区域,在许多情况下,还包括促进这一过程的调节蛋白的结合位点,决定RNA聚合酶转录起始位点的DNA序列。 引物是一小段单链DNA或RNA,引物可以做为DNA复制开始时DNA聚合酶的结合位点,在细胞外的条件下,只有通过引物,DNA才可以开始进行复制。引物是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。
启动子是位于结构基因前的非编码区对转录起调控作用的一段DNA序列。引物则是游离于DNA复制的模板链之外的对DNA复制起调控作用的一小段单链DNA或RNA。

2, PCR引物是什么?



通俗的讲,引物就是为了增幅目的DNA而导入的短小DNA片断,在PCR反应中,新合成的DNA是要接在引物上才能继续按照模版DNA复制。引物的设计因需要增幅的序列而不同。举个例子来说,你要增幅如下序列:
accctcccgccccccccgtat
(互补碱基不写了)
那么一般来说,你就要导入以accctc结尾的引物使得增幅继续下去,具体方法和注意事项楼主可以看gee_an大侠的资料。
查了一下测序公司的网页,如果要同定微生物,楼主需要准备如下东东:
1、待测菌体。试管或培养皿都可以,但必须是纯粹的待测菌体,不能含有其他的微生物。
2、提纯的DNA。如果1有致病性或传染性,那么楼主就得自己提纯DNA再交给测序公司。DNA纯度要求可以做PCR。
PS:很佩服楼主充足的经费,我们这里同定一次要2800人民币……

3, PCR中的引物是什么



PCR引物又称为寡核苷酸引物,也就是RNA,是由人工合成的,分为两种,引物1和引物2。由于DNA聚合酶只能从核苷酸链的5"端到3"端进行复制,也就是只能识别3"的尾端,而且只能把核苷酸连到已经和DNA模板互补产生的多核苷酸链上,所以引物1和2分别于双链DNA的两条链的尾部(就是末尾是3"端的那一边)结合,为那些脱氧核苷酸提供3"的末端,就相当于开了个头。然后在DNA聚合酶的作用下合成两条新链。而那段引物就成了新链的一部分。
其实在生物体内的DNA复制也是这样的一个过程,只是引物是人体自身合成的。
我知道这些很难理解,我当初看了半天,这里只是用我自己的理解来告诉你
希望我的回答能让你满意

4, TAQMAN引物怎么设计



引物就是为了增幅目的DNA而导入的短小DNA片断,在PCR反应中,新合成的DNA是要接在引物上才能继续按照模版DNA复制.引物的设计因需要增幅的序列而不同.举个例子来说,你要增幅如下序列:
accctcccgccccccccgtat
(互补碱基不写了)
那么一般来说,你就要导入以accctc结尾的引物使得增幅继续下去,具体方法和注意事项楼主可以看gee_an大侠的资料.
查了一下测序公司的网页,如果要同定微生物,楼主需要准备如下东东:
1、待测菌体.试管或培养皿都可以,但必须是纯粹的待测菌体,不能含有其他的微生物.
2、提纯的DNA.如果1有致病性或传染性,那么楼主就得自己提纯DNA再交给测序公司.DNA纯度要求可以做PCR.

相关概念


DNA

脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid,缩写为DNA)又称去氧核糖核酸,是一种最重要的生命基础分子,可组成遗传指令,以引导生物遗传、生物发育与生命机能运作。 主要功能是长期性的信息储存,可比喻为“蓝图”或“食谱”。其中包含的信息,是建构细胞内其他化合物的最终源头。带有遗传信息的DNA片段称为基因,其他的DNA序列,有些直接以自身构造发挥作用,有些则参与调控遗传信息的表达。DNA是一种长链聚合物,其基本组成单位称为核苷酸,其中的脱氧核糖与磷酸借由酯键相连,组成DNA长链的骨架。每个糖单位都会与某一种碱基相连,组成生物界DNA的碱基主要有四种,分别称为A、T、C、G,这些碱基沿着DNA长链排列,形成的序列,即是遗传信息,用以指导RNA的合成,进而指导蛋白质的合成。

引物

引物,是指在核苷酸聚合作用起始时,刺激合成的一种具有特定核苷酸序列的大分子,与反应物以共价键形式连接,这样的分子称为引物。引物通常是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与靶区域一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与靶区域另一端的另一条DNA模板链互补,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,核酸聚合酶可由其3端开始合成新的核酸链。体外人工设计的引物被广泛用于聚合酶链反应、测序和探针合成等。

RNA

核糖核酸(缩写为RNA,即Ribonucleic Acid),核糖核酸存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。 RNA由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而成长链状分子。一个核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和碱基构成。RNA的碱基主要有4种,即A腺嘌呤、G鸟嘌呤、C胞嘧啶、U尿嘧啶,其中,U(尿嘧啶)取代了DNA中的T。 2018年5月,湖南大学生物学院病原生物学与免疫学研究所团队新发现了一种免疫抵抗RNA病毒的工作机制。

 
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