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寡核苷酸引物诱变技术 寡核苷酸引物的作用是什么?在PCR实验中的作用

来源:朵拉利品网  |  2019-06-28 18:05:36

1, 寡核苷酸引物的作用是什么?在PCR实验中的作用



PCR技术中的引物的本质和作用。
引物是一小段单链DNA或RNA,引物可以做为DNA复制开始时DNA聚合酶的结合位点,在细胞外的条件下,只有通过引物,DNA才可以开始进行复制。
引物是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。
启动子和引物两者的区别:
启动子是DNA分子上能与RNA聚合酶结合并形成转录起始复合体的区域,在许多情况下,还包括促进这一过程的调节蛋白的结合位点,决定RNA聚合酶转录起始位点的DNA序列。 引物是一小段单链DNA或RNA,引物可以做为DNA复制开始时DNA聚合酶的结合位点,在细胞外的条件下,只有通过引物,DNA才可以开始进行复制。引物是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。
启动子是位于结构基因前的非编码区对转录起调控作用的一段DNA序列。引物则是游离于DNA复制的模板链之外的对DNA复制起调控作用的一小段单链DNA或RNA。

2, 定点诱变技术经历了几个阶段?目前最理想的定点诱变方法是什么?...



定点诱变:可将病毒的随机突变纳入人们的规划之中,这一技术可将DNA基因组或RNA基因组的cDNA任何既定部位的核苷酸替换,或者使之缺失,或者插入另一段核苷酸。[1]
编辑本段方法
为达到这一目的,一般用分子杂交技术,即将含有特定位点变异的寡核苷酸通过分子杂交,导入载体DNA,再转化到载体中扩增杂交DNA,最后根据设计的分子标记,在一定条件下筛选突变株。由于PCR及核苷酸测序技术的日益普及,定点诱变在病毒学的应用更为方便,它可用于确定病毒基因的致病作用,也可用于研制具有免疫学标记的弱毒病毒疫苗等,受到普遍重视。许多病毒还可作为定点诱变所需的载体,根据不同目的可选用痘病毒、腺病毒、疱疹病毒、乳头瘤病毒、披膜病毒等。
在事先不了解特定核苷酸序列功能的情况下,通过定点诱变产物的分析,推测该序列编码的蛋白质性质及功能,这种利用基因序列资料反过来研究动物体内的遗传学效应的手段,称之为 反求遗传学,广泛应用于病毒的遗传变异研究。

相关概念


定点诱变

定点诱变 (Site-directed mutagenesis),是在体外特异性地取代、插入或缺失DNA序列中任何一个特定碱基的技术,包括盒式取代诱变、寡核苷酸引物诱变及PCR定点诱变等。

病毒

计算机病毒(Computer Virus)是编制者在计算机程序中插入的破坏计算机功能或者数据的代码,能影响计算机使用,能自我复制的一组计算机指令或者程序代码。 计算机病毒具有传播性、隐蔽性、感染性、潜伏性、可激发性、表现性或破坏性。计算机病毒的生命周期:开发期→传染期→潜伏期→发作期→发现期→消化期→消亡期。 计算机病毒是一个程序,一段可执行码。就像生物病毒一样,具有自我繁殖、互相传染以及激活再生等生物病毒特征。计算机病毒有独特的复制能力,它们能够快速蔓延,又常常难以根除。它们能把自身附着在各种类型的文件上,当文件被复制或从一个用户传送到另一个用户时,它们就随同文件一起蔓延开来。

 
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