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寡核苷酸探针设计原则 如何设计特异性荧光原位杂交探针

来源:朵拉利品网  |  2019-06-28 18:05:07

1, 如何设计特异性荧光原位杂交探针



1.探针分为好多种,你要先决定你用何种,是RNA探针还是DNA探针,杂交时,RNA-RNA结合的稳定性要比DNA-RNA好,所以RNA探针具有结合牢固、背景低等优点;DNA探针背景稍微深一些,不过也可以,标记方法比前者简单一些,另外还有寡核苷酸探针,此类探针分子量小,通透性好,但就是标记的敏感性不高。
2.原位杂交相比免疫组化,定位相对准确,但如果蛋白在间质中发挥作用,原位杂交就检测不出来了,结合图像分析,原位杂交也可以对目的基因的转录半定量。
3.首先是标本对照,这个包括阳性对照和阴性对照;第二个是探针对照,主要是明确探针的特异性;第三个是探针正义连阴性对照,第四个未标记探针竞争抑制;第五个不含探针的阴性对照;第六个质粒对照,第七个无关探针对照。
4.若要定量,该试验不可行,还是作Northern,若要显示形态、定位,最好结合免疫组化。

2, 寡核苷酸探针杂交的分子基础是什么?



watson,crike的DNA双螺旋模型。
如果是填空什么的这就够了。如果是论述大题的话(这个题目还不算大),我这里就不具体论述了简单的介绍一下论述思路吧。
(毕业多年,好久没学习了,具体的也说不太清楚了。唯记得上学的时候论述DNA双螺旋模型是整个分子生物学的基础一题,貌似还基本拿了满分)
首先:什么事寡核苷酸探针杂交,分子过程。这样就可以为论述其分子基础提供背景和素材;
其次:将DNA双螺旋模型是什么,有什么内容,太精确的不记得了,大致记得是可分为3点,1. 核酸单链,2. 两条链(不是3条或几条链聚合,双螺旋模型之前确实有人提出了DNA存在形式的3链结合模式),同时碱基互补配对;3. 扭转折叠成双螺旋结构;
最后:将DNA双螺旋模型和寡核苷酸探针杂交相结合,杂交过程都是以双链互补结合为基础的;

相关概念


双螺旋

《双螺旋》是大卫·斯雷德执导,乔丹·海耶斯、比利·坎贝尔主要的电视剧。 故事发生在一个北极研究基地里,一组来自美国疾控中心的科学家竭力调查一种神秘的变异病毒。如果这种病毒传播到外部世界,将带来「人类灭绝」灾难性的后果。在阻止这场灾难的同时,他们自己也要面对生死考验。

DNA

脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid,缩写为DNA)又称去氧核糖核酸,是一种最重要的生命基础分子,可组成遗传指令,以引导生物遗传、生物发育与生命机能运作。 主要功能是长期性的信息储存,可比喻为“蓝图”或“食谱”。其中包含的信息,是建构细胞内其他化合物的最终源头。带有遗传信息的DNA片段称为基因,其他的DNA序列,有些直接以自身构造发挥作用,有些则参与调控遗传信息的表达。DNA是一种长链聚合物,其基本组成单位称为核苷酸,其中的脱氧核糖与磷酸借由酯键相连,组成DNA长链的骨架。每个糖单位都会与某一种碱基相连,组成生物界DNA的碱基主要有四种,分别称为A、T、C、G,这些碱基沿着DNA长链排列,形成的序列,即是遗传信息,用以指导RNA的合成,进而指导蛋白质的合成。

论述

论述即理论性的描述,对某一或者许多问题、事件、研究等进行单一的或者归纳性的阐述并提出其中存在的问题或者解决的方法加以自己的话进行叙述。

 
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