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细胞培养视频 请问哪里可以下载到细胞培养的视频教程??急

来源:朵拉利品网  |  2020-05-14 18:58:57

1, 请问哪里可以下载到细胞培养的视频教程??急



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2, 求视频:RAW264.7细胞的培养 视频



1.取干净的盖玻片(剪去一角,以作为正反的标记)若干,用洗衣粉轻轻擦洗后烤干(注意轻柔,不要留下明显痕迹,方便以后观察细胞)。
2.硫酸重铬酸钾过夜。
3.取出盖玻片后,用自来水反复冲洗20遍。
4.用一蒸水漂洗10分钟,三蒸水冲洗3遍。
5.晾干后泡纯酒精过夜(主要是脱脂,也可用95%酒精),用镊子夹出(不能用手去接触玻片,否则应重新泡酒精脱脂),蒸馏水清洗后自然晾干(烤干容易使玻片留下水迹,而晾干的则清新干净)。
6.高温高压消毒。

3, 细胞培养用的爬片怎么处理



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在细胞培养过程中,除了培养基外,还经常用到一些平衡盐溶液、消化液、pH调整液等。
平衡盐溶液(balanced salt solution,BSS):主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH稳定及提供简单的营养。主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。最简单的BSS是Ringer。D-Hank"s与Hank"s的一个主要区别是前者不含有Ca2+、Mg2+,因此D-Hank"s常用于配制胰酶溶液。Earle平衡液含有较高的NaHCO3(2.2g/L),适合于5%CO2的培养条件,Hank"s平衡液仅含有0.35g/L NaHCO3,不能用于5%CO2的环境,若放入CO2培养相,溶液将迅速变酸,使用时应注意。





配制溶液应使用双蒸水或去离子水。如果配方中含有Ca2+、Mg2+,应当首先溶解这些成分。配好的平衡盐溶液可以过滤除菌或高温灭菌。
消化液:取材进行原代培养时常常需要将组织块消化解离形成细胞悬液,传代培养时也需要将贴壁细胞从瓶壁上消化下来,常用的消化液有胰酶(Trypsin)溶液和EDTA溶液,有时也用胶原酶(collagenase)溶液。
可以参考:
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1.胰酶溶液:胰酶活性可用消化酪蛋白的能力表示,常见有1:125和1:250,即一份胰酶可消化125或250份酪蛋白。组织培养用胰酶溶液一般配制成0.1-0.25%浓度,配制时要用不含Ca2+、Mg2+及血清的平衡盐溶液(如前面的D-Hank"s),因为这些物质会对胰酶产生抑制作用。胰酶作用及溶解的最佳pH是8-9,配制胰酶溶液应将液体调至pH8左右,充分溶解,过滤除菌。过滤后可以再调只pH7.5,也可不调。
使用细胞清洗液配制胰酶消化液:含0.5%胰酶的细胞清洗液(100ml细胞清洗液加0.5g胰酶),过滤除菌,分装于4度保存。
2.EDTA溶液:EDTA溶液也常用来解离细胞,它的作用机制是破坏细胞间的连接。对于一些贴壁特别牢固的细胞,还可以用EDTA和胰酶的混合液进行消化。EDTA溶液的使用浓度为0.02%,配制时应加碱助溶,配制后可过滤除菌,也可高温消毒灭菌。
3.胶原酶溶液:胶原酶在上皮类细胞原代培养时经常使用,胶原酶作用的对象是胶原组织,因此不容易对细胞产生损伤。胶原酶的使用浓度为0.1-0.3mg/L或200000U/L,作用的最佳pH为6.5。胶原酶不受Ca2+、Mg2+及血清的抑制,配制时可用PBS。








pH调整液:常用的有HEPES液和NaHCO3溶液。
1.NaHCO3溶液:NaHCO3是培养基中必须添加的成分,一般情况下按说明书的要求准确添加,以保证培养基在5%CO2的环境下pH达到设计标准。如果是封闭式培养,即不与5%CO2的环境发生交换达到平衡,所使用的培养基就不能按照说明书所要求加入NaHCO3。此时常用5.6%或7.4%的NaHCO3溶液调节培养基,使之达到所要求的pH环境。
2.HEPES溶液:是一种弱酸,中文名字是羟乙基哌秦乙硫磺酸,对细胞无毒性,主要作用是防止培养基pH迅速变动。在开放式培养条件下,观察细胞时培养基脱离了5%CO2的环境,CO2气体迅速逸出,pH迅速升高,若加了HEPES,此时可以维持pH7.0左右。一般在进行克隆化培养时要添加HEPES。

名词解释


盖玻片

载玻片是在实验时用来放置实验材料的玻璃片,呈长方形,较厚,透光性较好

玻片

当用显微镜(microscope)观察细胞时,应用薄薄的易碎透明小片,这个小片就是玻片。在光学上, 用于产生相位差的一种类似玻璃材料的薄片

 
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