1, 寡核苷酸和蛋白结合方式
核蛋白核蛋白nucleoprotein结合蛋白质中的一类。普遍存在于各种生物的细胞核中的特殊形态的蛋白质,由核酸与组蛋白、精蛋白等的碱性蛋白结合而成为细胞核的主要成分。根据核酸种类不同,可分为核糖核酸核蛋白和脱氧核糖核酸核蛋白。可从细胞核中提取得到,能溶解于1mol/L NaCl溶液中。核蛋白中的蛋白质包括组蛋白(或精蛋白)和非组蛋白蛋白质。组蛋白含碱性氨基酸如精氨酸、赖氨酸等丰富的碱性蛋白,带正电荷。精蛋白仅出现于真核细胞中,含较多的天门冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸,是酸性蛋白,带负电荷。一类由蛋白质和核酸结合而成的复合蛋白质。存在于一切生物。病毒是一类极简单的生物,它们的化学本质就是核蛋白。细胞中核蛋白主要存在于染色体和核糖体中。由于核酸有DNA和RNA两类,核蛋白也因而分为DNA-核蛋白和RNA-核蛋白两类。DNA-核蛋白主要存在于细胞核内,RNA-核蛋白主要存在于核糖体中。两类核蛋白的许多理化性质相似,都能被碱性染料染色,都不稳定,在热或碱的作用下易分解为核酸及蛋白质。DNA-核蛋白的粘性较强,不溶于等渗食盐溶液,溶于离子强度极低的盐溶液;RNA-核蛋白能溶于等渗食盐溶液。组成核蛋白的蛋白质部分主要是组蛋白和精蛋白等碱性蛋白,也有其他蛋白质如烟草花叶病毒的蛋白质,这种蛋白质分子极大,每个分子由2130条肽链组成,每天肽链的分子量为1.75万。核蛋白在遗传及蛋白质合成中起着决定性作用,也是生物体内某些病毒和噬菌体的惟一组成成分。由于核蛋白的核酸与生物遗传和蛋白质生物合成关系密切,因此有关核蛋白结构与功能的研究十分活跃。如烟草斑纹病毒、小儿麻痹症病毒、流行性感冒病毒等动植物病毒本身就是核蛋白,因此核蛋白的研究在动、植物病害的防治及临床医学上有十分重要意义。
2, DNA合成仪的使用方法操作步骤
以亚磷酰胺寡核苷酸合成为例介绍该类仪器的一般操作步骤。亚磷酰胺DNA合成的试剂有:保护碱基的5/—DMT,A、G、C、T亚磷酰胺单体,四唑偶联催化剂,乙酐,N—甲基咪唑封闭试剂,三氯乙酸(TCA)脱保护溶液,12氧化混合物,乙腈清洗溶剂,氨水切除溶液。使用步骤如下:1)仔细检查合成仪上所有试剂瓶中的试剂量,必要时换掉试剂瓶,特别注意乙腈的量,因为该溶剂用量较大。2)将标记好的清洁的收集瓶装在合成仪上。3)将要合成的DNA序列输入合成仪。4)检查选择的合成步骤是否正确。5)选择结束方法:TritylOffAuto是仪器的原始状态,若打算以5,—DMT基团连接纯化寡核苷酸,将其转变为TritylOnAuto结束状态。6)选择结束方法,一般为系统的原始状态。7)在每个柱监视器的Username下,输入你所希望的保存名字。8)以代码代替相应的DNA序列标记每一个收集瓶。9)打印出每一个柱设置的详细资料。10)检查打印出来的资料是否正确。11)运行StartColumn步骤检查每一个柱的位置,确保合成仪上合成柱处于正确的位置。12)检查连接在合成仪上的溶剂残留(废液瓶)是否充满。13)如果分部收集器用来收集每个DMT脱保护步骤的流出物,确保试管充分清洁干净,并打开分部收集器,确保DMT废液管路通向分部收集器。14)启动循环,运行开始程序清洗试剂管路,除去原来的试剂。注意:TritylOnAuto表示在合成寡核苷酸的5"端核苷酸带有一个DMT,并将其从固相载体上切下来,储存在收集瓶中;TritylOffAuto表示在合成寡核苷酸的5,端核苷酸没有保护基团,将其从固相载体上切下来,储存在收集瓶中;TritylOnManual表示合成寡核苷酸的5"端核苷酸带有一个DMT,寡核苷酸没有从固相载体上切下来,而是保留在合成柱中;TritylOffManual表示在合成寡核苷酸的5,端核苷酸没有保护基团,寡核苷酸没有从固相载体上切下来,而是保留在合成柱中。
影响DNA合成的实验结果的因素1、 偶联效率对总产量的影响无论采用何种纯化方法,从一个失败的合成中得到纯的寡核苷酸是不可能的。可以用分光光度法测定495nm的吸光度来准确地计算出合成的偶联效率,这是由于每个循环中末端核苷酸5"—OH的脱保护产生橘黄色吸收,这种颜色产生于DMT阳离子的释放,对测定每一步的偶联效率非常有用。在一个成功的合成中,从一个循环到下一个循环间,由于不完全偶联和未反应链的封闭所引起的颜色强度的下降非常小。偶联效率愈高,产率愈高,一定偶联率下,随着片段的延长,寡聚脱氧核苷酸的每步得率逐步下降。采用优质的试剂,在设计合理的DNA自动合成仪上平均偶联率可以达到99.5%,且仍有余地增加寡核苷酸合成的偶联率。如果日常平均偶联率可达到99.5%以上,DNA链的合成可超过200个核苷酸。2、 固相寡核苷酸合成的局限性对总产量的影响虽然DNA合成效率高,但是杂质不可避免地要积累。合成一个20mer的寡聚脱氧核苷酸,要包含100多个单独的化学步骤,每一步骤都有产生不必要的副反应的可能性。除了不完全的偶联所引起的失败片段的积累,去嘌呤化后的寡核苷酸链切除也可产生截去末端的片段。有时会出现碱基杂环的化学修饰,修饰的寡核苷酸产物可能是诱变剂,在生物学实验中容易引起严重的问题。由于副反应的出现,要得到很高纯度的寡核苷酸,必须应用很好的纯化方法进行纯化。
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结构
结构,句子成分即:主,谓,宾,定,状,补。 (1) [structure]∶组成整体的各部分的搭配和安排 经济结构 (2) [fabric]∶建筑物承重部分的构造 复合结构 (3) [build]∶构筑;建造 (4) [collude with]∶勾结
退火
退火是一种金属热处理工艺,指的是将金属缓慢加热到一定温度,保持足够时间,然后以适宜速度冷却。目的是降低硬度,改善切削加工性;消除残余应力,稳定尺寸,减少变形与裂纹倾向;细化晶粒,调整组织,消除组织缺陷。准确的说,退火是一种对材料的热处理工艺,包括金属材料、非金属材料。而且新材料的退火目的也与传统金属退火存在异同。