2, 做原位杂交的探针怎么设计
1.探针分为好多种，你要先决定你用何种，是RNA探针还是DNA探针，杂交时，RNA-RNA结合的稳定性要比DNA-RNA好，所以RNA探针具有结合牢固、背景低等优点；DNA探针背景稍微深一些，不过也可以，标记方法比前者简单一些，另外还有寡核苷酸探针，此类探针分子量小，通透性好，但就是标记的敏感性不高。2.原位杂交相比免疫组化，定位相对准确，但如果蛋白在间质中发挥作用，原位杂交就检测不出来了，结合图像分析，原位杂交也可以对目的基因的转录半定量。3.首先是标本对照，这个包括阳性对照和阴性对照；第二个是探针对照，主要是明确探针的特异性；第三个是探针正义连阴性对照，第四个未标记探针竞争抑制；第五个不含探针的阴性对照；第六个质粒对照，第七个无关探针对照。4.若要定量，该试验不可行，还是作Northern，若要显示形态、定位，最好结合免疫组化。
3, 请教关于microRNA原位杂交
RNA原位核酸杂交RNA原位核酸杂交（RNA nucleic acid hybridization in situ）又称RNA原位杂交组织化学（RNA in situ hybridization histochemistry）或RNA原位杂交（RNA in situ hybridization RISH）。该技术是指运用cRNA或寡核苷酸等探针检测细胞和组织内RNA表达的一种原位杂交技术。其基本原理是：在细胞或组织结构保持不变的条件下，用标记的已知的RNA核苷酸片段，按核酸杂交中碱基配对原则，与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合（杂交），所形成的杂交体经显色反应后在光学显微镜或电子显微镜下观察其细胞内相应的mRNA、rRNA和tRNA分子。RNA原位杂交技术经不断改进，其应用的领域已远超出DNA原位杂交技术。尤其在基因分析和诊断方面能作定性、定位和定量分析，已成为最有效的分子病理学技术，同时在分析低丰度和罕见的mRNA表达方面已展示了分子生物学的一个重要方向。RNA原位杂交不同于DNA原位杂交主要有：(1)检测目的不同：RNA原位杂交检测和分析的主要为内源性基因，包括细胞内固有基因、异常基因和变异基因。以正确反映组织与细胞之间相互关系及功能、代谢状态、探索疾病发病机理、观察治疗疗效和评估疾病预后等。其次为对外源性基因检测，以获得病毒和细菌类型等病原学诊断。而DNA原位杂交主要为外源性基因检测。(2)有较高的灵敏度：在检出细胞和组织内低拷贝核苷酸时，RNA原位杂交能获得较好定位，而DNA原位杂交则难以信任。(3)使用的探针不同：RNA原位杂交中多采用RNA或寡核苷酸探针，因此避免了应用双链DNA探针在杂交反应中存在的两条链之间的复性和第二条链的竞争性杂交问题。cRNA-RNA之间形成的杂交体要比DNA-DNA、cDNA-RNA杂交体性能稳定，在杂交反应后可用RNA酶洗脱，以除去未结合的探针，因此特异性更强。
相关概念
杂交
杂交（hybridization；cross；crossing），指两条单链DNA或RNA的碱基配对，是遗传学中经典的也是常用的实验方法。通过不同的基因型的个体之间的交配而取得某些双亲基因重新组合的个体的方法。一般情况下，把通过生殖细胞相互融合而达到这一目的过程称为杂交；而把由体细胞相互融合达到这一结果的过程称为体细胞杂交。杂交产生的后代称为杂种，不同种属之间，或是地理上远缘的种内亚种之间个体的交配称为远缘杂交，所得个体称为远缘杂种。
